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哺乳動物細胞培養過程 & 培養條件

發布時間:2019/12/10 9:31:13

哺乳動物細胞培養過程
哺乳動物細胞在培養過程中會經過組織提取,原代培養,傳代培養等過程。傳代培養會根據具體情況分為細胞株培養和細胞系培養。如下對各個過程進行簡述:
原代培養:從動物機體取出組織后切碎,經過各種酶(常用胰蛋白酶),螯合劑(常用EDTA)結合機械方法(吸液管反復吸吹)處理,分散成單細胞,置于合適的培養基中培養,使細胞得以生存、生長和繁殖。一般把從動物有機體內取出細胞開始培養,到繁殖十代以內的細胞培養稱為原代細胞培養。


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經過原代細胞培養,細胞分裂繁殖,培養物逐漸增多長滿培養空間,繼而相互之間接觸,發生接觸抑制現象,生長速度逐漸減慢甚至停止。需要重新接種到新的培養瓶內進行傳(繼)代培養。
傳(繼)代培養:將原代細胞從培養瓶中取出,配制成細胞懸浮液,分裝到兩個或兩個以上的培養瓶中繼續培養,稱為傳(繼)代培養。
細胞系:初代培養物開始第一次傳代培養后的細胞,即稱之為細胞系。如果細胞系的生存期有限,則稱為有限細胞系。已獲得無限繁殖能力,能持續生存的細胞系稱為連續細胞系或無限細胞系。
細胞株:從一個經過生物學鑒定的細胞系,用單細胞分離培養或通過篩選的方法,由單細胞增值形成的細胞群,稱為細胞株。再由原細胞株進一步分離培養出與原珠形狀不同的細胞群,成為亞株。

哺乳動物細胞培養條件
不同哺乳動物細胞在各個階段的培養,都需要有基礎的培養條件,歸納如下:
1、無菌無毒的環境:對培養液和所有培養用具無菌處理;培養液中添加抗生素防止培養過程中污染;定期更換培養液以清除代謝產物,防止對培養細胞造成危害。
2、營養:液體合成培養基包含糖、氨基酸、促生長因子、水、無機鹽、微量元素等;通常還需加入血漿、血清等天然成分
3、適宜的溫度和pH:人和哺乳動物細胞最適宜溫度大多為36±0.5℃。適宜的酸堿度為pH 7.2-7.4。
4、氣體環境:氣體環境一般為“95% 空氣+5% CO2”混合氣體。氧氣是細胞代謝必須氣體,CO2維持培養液pH。

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